Prinsip Kerja Spektrofotometri

Prinsip kerja Spektrofotometri berdasarkan hukum Lambert-Beer, bila cahaya monokromatik (I₀), melalui suatu media (larutan), maka sebagian cahaya tersebut diserap (I_a), sebagian dipantulkan (I_r), dan sebagian lagi dipancarkan (I_t). Transmitans adalah perbandingan intensitas cahaya yang di transmisikan ketika melewati sampel (I_t) dengan intensitas cahaya mula-mula sebelum melewati sampel (I_o).

Persyaratan hukum Lambert-Beer antara lain : Radiasi

yang digunakan harus monokromatik, nergi radiasi yang di absorpsi oleh sampel tidak menimbulkan reaksi kimia, sampel (larutan) yang mengabsorpsi harus homogeny, tidak terjadi flouresensi atau phosphoresensi, dan indeks refraksi tidak berpengaruh terhadap konsentrasi, jadi larutan harus pekat (tidak encer).